TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒的實驗流程會根據(jù)樣本類型(細(xì)胞、石蠟切片、冰凍切片)略有差異，以下是通用標(biāo)準(zhǔn)化操作步驟，可直接參考執(zhí)行。
 

　　一、TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒實驗前準(zhǔn)備

 

　　‌試劑預(yù)處理‌：將試劑盒內(nèi)各組分短暫離心，收集管底殘留液體，提前準(zhǔn)備好PBS緩沖液、4%多聚甲醛固定液、通透劑等配套耗材。
 

　　‌樣本預(yù)處理‌：根據(jù)樣本類型完成基礎(chǔ)處理，貼壁細(xì)胞用PBS輕洗1次，石蠟切片完成二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化。
 

　　二、固定與通透
 

　　‌固定‌：用4%多聚甲醛室溫固定樣本30~60分鐘，之后用PBS洗滌1~2次。
 

　　‌通透‌：加入含0.1% Triton X-100的PBS，冰浴孵育2分鐘；石蠟切片可改用20μg/mL的蛋白酶K，37℃孵育15~30分鐘，之后用PBS充分洗滌3次，避免殘留酶干擾后續(xù)反應(yīng)。
 

　　三、標(biāo)記反應(yīng)
 

　　‌平衡‌：滴加TdT Equilibration Buffer覆蓋樣本，37℃濕盒中平衡10~30分鐘。
 

　　‌配制檢測液‌：按比例混合TdT酶與熒光標(biāo)記液，現(xiàn)配現(xiàn)用，單次用完不可凍存。
 

　　‌孵育標(biāo)記‌：每個樣本滴加50μL TUNEL檢測液，放入濕盒中37℃避光反應(yīng)60分鐘，避免反應(yīng)液蒸發(fā)。
 

　　四、復(fù)染與觀察
 

　　‌洗滌‌：用PBS充分洗滌樣本3次，每次5分鐘，去除未結(jié)合的標(biāo)記液。
 

　　‌復(fù)染封片‌：滴加DAPI工作液室溫避光孵育5分鐘，用含抗熒光淬滅劑的封片劑完成封片。
 

　　‌檢測拍照‌：熒光顯微鏡下選擇對應(yīng)激發(fā)/發(fā)射波長觀察，綠色熒光用450~500nm激發(fā)、515~565nm發(fā)射通道，完成圖像采集。
 

　　五、陽性對照設(shè)置
 

　　滴加100μL 1X DNase Buffer到已通透的樣本上，室溫平衡5分鐘。
 

　　滴加DNase工作液37℃孵育10分鐘，人為誘導(dǎo)DNA斷裂，后續(xù)按正常流程完成標(biāo)記，可驗證實驗體系有效性。